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实验十九 牛肉膏卵白胨培养基的制备
一、方向要求
1．明确培养基的配制旨趣。
2．通过对牛肉膏卵白胨培养基的配制，掌捏配制培养基的一般措施和法子。
二、基痛快趣
牛肉膏卵白胨培养基是一种应用最庸俗和最平方的细菌基础培养基，偶而又称为平方培养基。它含有牛肉膏、卵白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和动力，磷酸盐、卵白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时融化，一般现实应用时在热水浴中或底下垫以石棉网煮沸融化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，常常不被微生物明白行使。固体培养基中琼脂的含量凭据琼脂的质地蔼然温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的滋长繁衍。
牛肉膏卵白胨培养基的配方如下：
牛肉膏 3g
卵白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15—20g
水 1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
牛肉膏，卵白胨， NaCl，琼脂；
1mol/L NaOH黑丝 jk， 1mol/L HCl；
试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，标志笔，麻绳，纱布等。
四、操作法子
1．称量
按培养基配方比例顺次准确地称取牛肉膏、卵白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或名义皿中称量，用热水融化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后告成放入水中，这时如略略加热，牛肉膏便会与称量纸分别，然后立即取出纸片。卵白胨很易吸潮，在称取时行动要飞快。另外，称药品时提神药品搀和，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．融化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品绝对溶解后，补充水分到所需的总体积。若是配制固体培养基，将称好的琼脂放入已融化的药品中，再加热融化，在琼脂融化的经由中，需不休搅动，以防琼脂糊底使烧杯破碎。终末补足所失的水分。
3．调pH
萝莉 崩坏：星穹铁道在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，若是pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅动，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行治疗。防御pH值不要调偏执，以幸免回调，不然，将会影响培养基内各离子的浓度。
关于有些要求pH值较精准的微生物，其pH的治疗可用酸度计进行（使用措施，可参考筹谋阐述书）。
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利成果的不雅察。一般无罕见要求的情况下，这一步不错省去（本实验无需过滤）。
5．分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装安装见图Ⅴ-1。
分装经由中防御不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免浑浊棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4傍边为宜。
(2)固体分装分装试管，其装量不跳跃管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不跳跃三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
6．加塞
培养基分装杀青后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻拦外界微生物插足培养基内而形成污染，并保证有艰深的通气性能（棉塞制作措施附本实验后头）。
7．包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以郑重灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用总共麻绳扎好。用标志笔注明培养基称呼、组别、日历。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活扣样式扎好，使用时容易解开，相同用标志笔注明培养基称呼、组别、日历。
8．灭菌
将上述培养基以1．05kg/cm2 （15磅/英寸2 ），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因罕见情况不行实时灭菌，则应放入雪柜内暂存。
9．扬弃斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃傍边，将试管棉塞端搁在玻棒上，扬弃的斜面长度以不跳跃试管总长的一半为宜。
10．无菌查验
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以查验灭菌是否澈底。
附：棉塞的制作
棉塞的作用有二：一是郑重杂菌污染；二是保证通气艰深。因此，棉塞质地的优劣对实验的成果有很大的影响。正确的棉塞要求体式、大小、松紧与试管口（或三角烧瓶口）绝对符合，过紧则结巴空气通顺，操作未便；过松则够不上滤菌的方向。加塞时，应使棉塞长度的1/3在试管口外，2/3在试管口内，如图Ⅴ-3。棉塞的制作经由如图Ⅴ-4。
此外，在微生物实验和科研中，常要用通气塞。所谓通气塞，便是几层纱布（一般为8层）互相重复而成，或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成。这种通气塞常常加在装有液体培养基的三角烧瓶口上。经接种后，放在摇床上进行飘摇培养，以获取艰深通气促使菌体的滋长或发酵。通气塞的体式如图Ⅴ-5。
五、实验线路
念念考题
（1）培养微生物的培养基应具备哪些要求？为什么？
（2）在配制培养基的操作经由中应防御些什么问题？为什么？图Ⅴ—5通气塞A．配制时纱布塞法；B．灭菌时包牛皮纸；C．培养时纱布翻出
（3）培养基配好后黑丝 jk，为什么必须立即灭菌？若何查验灭菌后的培养基是无菌的？